和大家分享一篇发表在Chemical Science上的文章“Label-free target identification using in-gel fluorescence difference via thermal stability shift”，本文的通讯作者是来自首尔国立大学的化学生物学系的Seung Bum Park教授。

       与靶点结合是生物活性小分子发挥治疗作用的先决条件，目标蛋白质的无偏识别可促进药物发现和化学生物学研究。活性天然产物的结构修饰在靶点鉴定中展现出了潜在的限制，例如合成上的困难，天然来源的不足和原始功效的丧失。在传统的细胞热稳定性测定中，蛋白质与生物活性分子的结合可以使其稳定，抵抗热变性，使Tm升高。Western Blot Analysis确定上清中的蛋白含量时在一定程度上限制了该方法的无偏见性——即要求可鉴定的蛋白应有相对应的抗体。

        在本篇文章中，作者发展了一项技术——由热稳定性转移引起的凝胶内荧光差异（即TS-FITGE）的蛋白质组范围靶标鉴定的无标记新方法。具体的操作分为不使用小分子药物teart的对照组和使用小分子药物treat的实验组，将各组的样品在不同温度下变性一段时间，均离心取上清未变性的蛋白质，对照组中加入Cy3(绿色)，实验组中加入Cy5（红色），将实验组和对照组中变形温度和时间一致的组别combine，通过2DE，再经图像自动处理技术可以得到混合点的Cy5与Cy3的比值并定量，绿色与红色没有thermal stability Shift的蛋白质认为不是小分子药物的靶蛋白，有差异的蛋白认为是前在的靶点。在本篇文章中，作者首先用已知蛋白靶点的methotrexate and bryostatin 1分子验证了该方法的可靠性，随后鉴定并验证了一种简单天然产物hordenine的靶蛋白。

原文引用: 10.1039/c6sc03238a

原文链接：http://pubs.rsc.org/-/content/articlehtml/2016/sc/c6sc03238a