为大家分享一篇发表在JACS上的文章，文章的题目是“Photoproximity Labeling of Sialylated Glycoproteins (GlycoMap) Reveals Sialylation-Dependent Regulation of Ion Transport”通讯作者是来自普林斯顿的David W. C. MacMillan教授，MacMillan教授曾在2021年凭借对不对称催化的贡献获得了诺贝尔化学奖，他也是光氧化还原催化领域的领军人物。

糖基化是重要的翻译后修饰之一，糖基化的失调与被证明与癌症转移、免疫逃逸等多种疾病表型相关联。唾液酸修饰作为糖基化修饰之一，与肿瘤的发展息息相关，但目前仍缺乏高分辨率的工具来研究唾液酸化蛋白相关的生化机制。在最近的研究中，Kohler等人成功使用带有光交联剂(diazirine)唾液酸分子代谢标记在唾液酸相互作用底物上。因此作者希望能通过引入铱催化剂的策略，进一步提高该方法的特异性和时空分辨率。

文章策略的整体流程是，首先使用唾液酸生物合成的前体非天然糖Ac4ManNAz代谢标记细胞，进而使用DBCO-iridium将铱催化剂通过SPAAC引入到唾液酸化蛋白上，最后加入生物素化的diazirine和光照，铱催化剂催化diazirine生成卡宾从而将生物素标记在唾液酸化蛋白的相互作用蛋白上。

在验证了方法的可行性后，作者将该策略与基于TMT标签的定量化学蛋白质组学结合，以便一揽子识别唾液酸化的细胞表面糖蛋白。作者使用DBCO-biotin来标记唾液酸化糖蛋白，DBCO-iridium + biotin-diazirine来标记唾液酸化糖蛋白及其相互作用蛋白，接着通过streptavidin富集和TMT定量标记，结果中绝大多数(93%)都是已知的糖蛋白。其中作者选择了异源四聚体蛋白NCSTN, APH1A, PSEN1, PEN-2进行了验证，其中只有NCSTN被直接唾液酸化，结果显示只有NCSTN在DBCO-biotin组中被打到，而APH1A在DBCO-iridium组中被高度富集，充分证明了该方法可以有效区分糖蛋白本身及其相互作用蛋白。

最后作者系统比较了HeLa细胞和原发性宫颈癌细胞PCC，结果显示前者有更多的唾液酸化蛋白和相互作用蛋白，说明了不同细胞系间唾液酸化的差异。