S-氰化肽的肼解为天然化学连接（NCL）提供了关键基团——酰肼，该方式无需任何内含肽或Sortase A酶的帮助。然而目前使用的非选择性S-氰基化方法对于蛋白质中多个半胱氨酸具有一定的局限性，因此本文开发了一种合适的正交保护系统以此特异性地氰化末端硫醇。

      作者使用在POI的C 末端融合四半胱氨酸标签——CCPGCC，该标签可以被双砷化合物（FlASH-EDT2）高度选择性地靶向，该化合物在蓝光下显示黄色荧光，通常用于蛋白质荧光标记。根据文献调研，作者发现二硫醇试剂可以脱除FlASH-EDT2与四半胱氨酸标签的结合，接下来作者使用模型肽向我们展示了该策略，首先添加 FLASH-EDT2 以保护 CCPGCC 基序，作者进一步将 2-溴苯乙酮 (PacBr) 添加到反应混合物中以对剩余的 Cys 进行正交保护，该部分将一直保留到肼解或 NCL 之后。然后加入过量的二硫醇试剂 EDT以在几分钟内将FlASH-EDT2 从四半胱氨酸标签脱除。接下来，作者即可通过简便的 NTCB对四半胱氨酸标签上的巯基进行特异性的氰基化反应以及后续顺利的肼解，转化成肽酰肼。在肽酰肼活化为相应的硫酯后，即可与另一种模型肽进行 NCL，得到 Pac 标记的连接产物。最后，在室温下使用脱除Pac PG生成目标肽产物，产率约为 16%。

      最后，作者采用该种策略半合成了铁硫蛋白 (pfRd)、基质金属蛋白酶14催化结构域和铰链结构域等。总之，本文报道了一种区域选择性氰基化和无痕肼解策略，该策略提供的蛋白质 α-酰肼用于天然化学连接。

本文作者：ZJ

责任编辑：Guo ZH

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 https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/anie.202115377

文章引用：DOI：10.1002/anie.202115377