澳大利亚昆士兰大学分子生物科学研究所Thomas E. Hall教授在Bio-protocol上发表了题为“Proximity Dependent Biotin Labelling in Zebrafish for Proteome and Interactome Profiling”的文章。文章描述了一种用于蛋白质组和相互作用组分析的斑马鱼中的邻近依赖性生物素标记的方法。这篇文章描述的方法最早在eLife杂志上发表的“In vivo proteomic mapping through GFP-directed proximity-dependent biotin labelling in zebrafish”中使用。这篇文章被收录在Bio-protocol精心挑选编制的《2022发育生物学实验方案精选集》。识别蛋白质相互作用网络是理解复杂的生物过程的关键，但绘制这样的网络对传统的生化方法来说是一个挑战，特别是弱或短暂的相互作用。近缘依赖生物素标记(BioID)利用混杂生物素连接酶和质谱(MS)为基础的蛋白质组学在过去十年中已经成为一种探测局部蛋白质组和蛋白质相互作用体的强大方法。在这里，研究人员描述了一种工程生物素连接酶TurboID在斑马鱼体内的蛋白质组学定位和相互作用体筛选中的应用。生成了新的转基因斑马鱼株系，该株系表达的TurboID融合到一个条件稳定的gfp结合纳米体dGBP中，dGBP将TurboID靶向到gfp标记的蛋白上。通过与已有的gfp标记系异交，TurboID-dGBP斑马鱼可以在活斑马鱼中进行近缘依赖生物素标记。
BLITZ方法的示意图概述
本文概述了BLITZ方法(标记斑马鱼的生物素标记)的详细方案，该方法利用TurboID-dGBP鱼线来绘制局部蛋白质组和筛选新的相互作用子。原创 古胧 BioscienceProtocols
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